کیت خون مخفی در مدفوع
مدل ELISA
محتویات کیت: 1-بافر شستشو (Wash buffer) 2-بافر رقیق کننده (Diluent buffer) 3- بافر آماده سازی مدفوع 4- آنتی بادی اولیه 5- کونژوگه (Secondary antibody) 6-سوبسترا (TMB) 7- بافر متوقف کننده (Stopping buffer) 8– محلول استاندارد (Standard sample) 9-پلیت که کاپچر آنتی بادی در آن کت شده است. مواد مورد نیاز برای آزمایش: 1- دستگاه الایزا ریدر 2-لوله و ظروف رایج آزمایشگاه
محصولات مشابه
روش انجام آزمایش:
1-به تعداد نمونه بیمار از چاهک های پلیت انتخاب کنید. علاوه بر این 5 چاهک دیگر برای استانداردها در نظر بگیرید
2-سه بار پلیت را با بافر واش شستشو دهیدو برای این منظور 2 میلی لیتر از بافر شستشو را با 18 میلی لیتر آب مقطر مخلوط کرده و در هر چاهک مورد آزمایش 100 میکرولیتر بافر شستشوی رقیق شده را بریزید و پلیت را 5 دقیقه روی شیکر فرار دهید. سپس بافر شیتشو را خالی کرده و این عمل را دو بار دیگر تکرار کنید. شیتشوی چاهک های مورد آزمایش هم با روش دستی و هم با دستگاه الایزا واشر قابل انجام است. بعد از آخرین شستشو و خالی کردن بافر شستشو به هر جاهک نمونه مدفوع آماده شده را اضافه کنید.
3-آماده سازی نمونه مدفوع: به تعداد تست انتخاب شده لوله آزمایش حدود 5 میلی لیتر انتخاب کرده (برای هر بیمار یک لوله) و در هر لوله دو میلی لیتر بافر آماده سازی مدفوع بریزید. به لوله ها آنقدر مدفوع اضافه کنید که حجم هر کدام به 2.5 میلی لیتر برسد. با اپلیکاتور مدفوع و بافر را خوب مخلوط کنید. لول ها را با دور 4000 ده دقیقه سانتریفوژ کنید. در مرحله بعد 50 میکرولیتر از مایع رویی هر لوله را برداشته و در میکروتیوب تمیز (برای هر بیمار یک لوله) با 150 میکرولیتر مایع رقیق کننده مخلوط کنید. در نهایت 100 میکرولیتر از محتوی هر میکروتیوب را به یک چاهک پلیت الایزا اضافه کنید. برای تهیه بافر رقیق کننده مورد استفاده ، بافر رقت سازی موجود در کیت را به نسبت 10/1 با آب مقطر رقیق کنید (1 میلی لیتر بافر رقیق کننده و 9 میلی لیتر آب مقطر). 5برای چاهک های استاندارد، رقت سریال 2/1، 4/1، 8/1، 16/1 و 32/1 از استاندارد با بافر رقیق کننده مورد استفاده تهیه و در 5 چاهک بریزید (هر رقت در یک چاهک). سپس پلیت را یک ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتی گراد قرار دهید.
4-پلیت را سه بار به شرح مرحله ئو شستشو دهید.
5-آنتی بادی اولیه موجود در کیت را با رقت 100/1 با بافر زقیق کننده مورد استفاده رقیق کرده و به هر چاهک 100 میکرولیتر اضافه کنید. سپس پلیت را یک ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتی گراد قرار دهید.
6-پلیت را سه بار به شرح مرحله ئو شستشو دهید.
7-کونژوگه را به نسبت 100/1 با محلول رقیق کننده مورد استفاده رقیق کنید و به هر چاهک 100 میکرولیتر اضافه کرده و یک ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
8-پلیت را سه بار شستشئو دهید و به همه چاهک ها (تست و استاندارد) به هر چاهک 100 میکرولیتر از سوبسترا (TMB) اضافه کنید.
7-بعد از 5 دقیقه به همه چاهک ها به هر چاهک 100 میکرولیتر از استوپر اضافه کنید.
8- پلیت را با الایزا ریدر با تو ل موج 450 قرائت کنید.
9-در یک محور مختصات محور X را غلظت و محور Yرا OD در نظر بگیرید. غلظت های رقت های پنج گانه عبارتند از 15 میلیگرم، 750 نانوگرم، 370 نانوگرم، 185 نانوگرم و 92 نانوگرم در میلی لیتر است. . با و صل نقاط غلظت و OD هر نمونه منحنی نمودار را به دست آورید. برای تعیین میزان خون نمونه بیماران از OD هر نمونه خطی عمودی به منحنی رسم کرده و از نقطه تلاقی خطی به محور X عمود کنید تا غلظت آن بدست اید.
نگهداری کیت: کیت ها در دمای آزمایشگاه 8-4 درجه سانتیگراد نگهداری شوند
پایداری کیت: تا تاریخ مندرج بر روی جعبه قابل مصرف می باشد. پایداری این کیت در دمای آزمایشگاه پس از تولید 6 ماه میباشد.
دیدگاه خود را بنویسید