Radial Immunodiffusion (RID)
در این روش آنتی بادی به ژل اضافه شده، سپس آنتی ژن داخل چاهک ها قرار می گیرد. در این محیط وقتی آنتی ژن بصورت رادیال انتشار می یابد با مولکو های آنتی بادی موجود در ژل کمپلکش ایجاد میکند و بنابر این حلقه های رسوبی تشکیل میشود قطر این حلقه ها با مقدار آنتی ژن چاهک متناسب است. به عبارتی در این روش وقتی انتشار آنتی ژن متوقف شود در این صورت واکنش متوقف شده و قطر حلقه زیادتر نخواهد شد. این روش یک روش کمی است و اگر آنتی ژن استاندارد با غلظت معین استفاده شود می توان مقدار آنتی ژن مجهول را اندازه گیری کــرد.
محتویات کیت:
1- پلیت رادیال ایمنودیفوژن حاوی چاهک ها
2- استاندارد (Standard)
3-نمونه مجهول (Sample)
روش انجام آزمایش:
- کیت را از یخچال خارج کنید تا به دمای محیط برسد.
- چهار رقت از استاندارد تهیه کنید (استاندارد لاکتوفرین و غلظت آن 4mg/ml است)
- ژل داخل چاهک ها را با سرسوزن خارج کرده و 30 میکرولیتر از هر رقت را داخل چاهک ها بریزید
- یک چاهک را هم با همان حجم به نمونه مجهول اختصاص دهید.
- ظرف حاوی ژل را در یک اطاقک مرطوب گذاشته و در انکوباتور 37 درجه به مدت حداقل 48 ساعت نگهداری کنید.
- بعد از آن حلقه ایجاد شده را در یک زمینه تیره مشاهده و قطر آن رابا خط کش یا کولیس اندازه گیری کنید.
روش رسم منحنی استاندارد و تعیین غلظت نمونه مجهول:
روی کاغذ میلیمتری محور مختصات را رسم کرده و محور X را به غلظت های مختلف استاندارد اختصاص دهید. روی محور Y مجذور قطر حلقه های رسوبی مربوط به غلظت ها ی استاندارد را بنویسید. سپس برای هر غلظت نقطه اتصال محور های X و Y را به دست آورید. آز اتصال نقاط به دست آمده منحنی استاندارد را رسم نمایید. در مورد ی نمونه قطر حلقه رسوبی را با کولیس اندازه گیری کنید و نقطه مجذور آن را روی محور Y پیدا کنید و از آن خطی به منحنی استاندارد عمود کنید. از این نقطه به دست آمده روی منحنی استاندارد خطی به محور X عمود کنید. نقطه ای که رو ی این محور به دست می آید نشان دهنده غلظت نمونه است.
کیت آموزشی ژل ایمنو دیفوژن
روش ژل ایمنو دیفوژن یکی از روش هایی است که واکنش آنتی ژن- آنتی بادی را در ژل نشان می دهد و از دسته روش های انتشار در ژل می باشد. در این روش واکنش آنتی ژن- آنتی بادی بصورت ساده و با چشم قابل مشاهده می باشد. بنابراین روش مناسبی برای آموزش واکنش آنتی ژن- آنتی بادی است.
مواد موجود در کیت:محلول آنتی بادی
- پلیت حاوی ژل پانچ شده
- آنتی بادی (Antibody)
- آنتی ژن (Antigen)
روش کار:
- کیت را از یخچال خارج کنید تا به دمای محیط برسد.
- درب پلیت را باز کنید و چاهک های پانچ شده را با سر سوزن خارج کنید.
3.50 میکرولیتر از محلول آنتی بادی را در چاهک وسط بریزید و 50 میکرولیتر از محلول آنتی ژن را در یکی از چاهک های اطراف بریزید. درون چاهک بعدی از نمونه مجهول بریزید.
- درب پلیت را بسته و ترجیحا آنرا داخل یک ظرف پلاستیکی که درب آن خوب بسته میشود و کف آن یک لایه دستمال کاغذی مرطوب است (اطاقک مرطوب)به مدت حداقل 48 ساعت در دمای 37 درجه قرار دهید.
- بعد از آن پلیت را از نظر خطوط رسوبی بین چاهک های آنتی ژن و آنتی بادی بررسی کنید. وجود خطوط رسوبی بین آنتی ژن و آنتی بادی نشان دهنده مثبت بودن و عدم وجود خط رسوبی نشان دهنده منفی بودن تست است (شکل).
